page contents Your SEO optimized title page contents
خانه / آموزش / روش رنگ سنجی MTT
روش رنگ سنجی MTT
روش رنگ سنجی MTT

روش رنگ سنجی MTT

سنجشِ تکثیر و بقای سلولی به روش MTT

بررسی تکثیر و بقای سلولی از تکنیک­های مهم و اساسی در آزمایشگاه­های سلولی محسوب می­شود. این بررسی نیازمند کمّی سازی دقیق تعداد سلول­های زنده در محیط کشت سلولی است. بنابراین روش­های محاسبۀ بقای سلولی جهت بهینه­ سازی شرایط کشت سلول، ارزیابی عوامل رشد سلولی، کشف آنتی­ بیوتیک­ها و داروهای ضد سرطان، ارزیابی اثرات سمّی آلاینده ­های محیطی و مطالعات آپوپتوز ضروری هستند

برای چنین اهدافی روش­های متعددی می­توانند مورد استفاده قرار گیرند اما روش­های غیرمستقیم با استفاده از نشانگرهای فلورسنت یا رنگ­زا (کروموژن)، روش­هایی بسیار سریع در مقیاس بزرگ را فراهم می ­کنند. از میان این روش­ها، سنجش بقای سلولی به روش MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) پرکاربردترین روش محسوب می­ شود. این روش، یک روش رنگ سنجی برای بررسی تکثیر و بقای سلول­ها است که در سال ۱۹۸۳ توسط Mossman معرفی گردید.

اساس این روش مبتنی بر فعالیت میتوکندری می­ باشد. فعالیت میتوکندریایی در سلول­های زنده به صورت پایدار است و بنابراین افزایش یا کاهش تعداد سلول­های زنده به صورت خطی با فعالیت میتوکندری در ارتباط می­ باشد. رنگ تترازولیموم MTT در سلول­های فعال (به لحاظ متابولیکی)، إحیا می­ شود. دهیدروژنازهای میتوکندریایی در سلول­های زنده، حلقۀ تترازولیوم را شکسته و با تولید NADH و NADPH منجربه تشکیل رسوب نامحلول ارغوانی رنگ به نام فورمازان می­شوند. این رسوب می­تواند توسط ایزوپروپانول یا دی متیل سولفواکسید حل شود. از سوی دیگر، سلول­های مرده، چنین توانایی را نداشته و بنابراین سیگنالی را نشان نمی­ دهند. در این روش، تشکیل رنگ به عنوان نشانگر سلول­های زنده مورد استفاده قرار می ­گیرد. شدت رنگ تولید شده، در طول موج ۵۴۰ تا ۶۳۰ نانومتر اندازه­ گیری می­ شود و به طور مستقیم با تعداد سلول­های زنده متناسب است.

کاربردهای مهم این روش عبارتند از :

اندازه ­گیری تکثیر سلولی در پاسخ به عوامل رشد، سایتوکاین­ها، میتوژن­ها و مواد مغذی
تجزیه و تحلیل ترکیبات کشندۀ سلول یا متوقف کنندۀ رشد سلول مانند داروهای ضد سرطان، سموم، آلاینده­های محیط زیست و سایر عوامل دارویی
ارزیابی واسطه­ های فیزیولوژیک و آنتی­بادی­های مهار کنندۀ رشد سلولی
کشف دارو، غربالگری داروهای سمی و ضد سرطان
مطالعۀ فعالیت سلول
بررسی اتصالات سلولی
مطالعات سمیّت شیمیایی
ایمنی بالا و فراهم نمودن یک سیستم رنگ سنجی و غیر رادیواکتیو از مزایای مهم این روش محسوب می­ شوند. استفاده از این کیت بسیار راحت است، حساسیت و دقت بالایی دارد و کمتر از ۹۵۰ سلول را می­تواند شناسایی کند. از سوی دیگر بازدهی بالایی برای اندازه­گیری تکثیر، بقاء و مرگ و میر سلولی دارد و روش اجرای آن نیازی به مراحل وقت گیر شستشو و انتقال از یک پلیت به پلیت دیگر را ندارد. نمونه­های مورد بررسی در این روش عبارتند از سلول­های چسبنده یا معلق و سلول­های تکثیر شونده یا غیر تکثیر شونده.

جهت بررسي اثر سايتوتوكسيسيتي ترکیبات دارویی بر رشد و تکثیر سلول های سرطانی و تعيين IC50 این ترکیبات، از روش رنگ سنجی MTT استفاده می شود.

پودر MTT یک نمک تترازولیوم محلول در آب است و هنگامیکه این ترکیب در محیط کشت فاقد فنول رد یا بافر PBS حل می شود، ترکیب زرد رنگی ایجاد می کند. اساس این تست شکستن نمک MTT توسط آنزیم سوکسینات دهیدروژناز میتوکندریایی سلول های زنده است. نتیجه این فعالیت ایجاد بلورهای نامحلول فورمازان ارغوانی رنگ است که توسط دی متیل سولفوکساید (DMSO) به صورت محلول در می آیند. هر چه سلول ها فعال تر و تعدادشان بیشتر باشد میزان رنگ ایجاد شده بیشتر است. جذب نوری رنگ ارغوانی ظاهر شده در طول موج ۴۹۰-۵۴۰ نانومتر با استفاده از دستگاه خواننده الیزا اندازه گیری می شود.

درباره ی salman varmaghani

همچنین ببینید

نوشتن رزومه

نوشتن حرفه ای رزومه و اصولی که باید در نوشتن رزومه رعایت کنید

نوشتن رزومه و اصولی که باید در نوشتن رزومه رعایت کنید نوشتن رزومه، تاثیرگذار کار دشواری نیست اما باید برخی اصول و قوائد را برای داشتن یک رزومه تاثیر گذار و قوی رعایت کنید. در نظر گرفتن نکات کلیدی زیر در نگارش و تهیه رزومه، موجب جلب نظر کارفرمایان و شرکت های مورد نظر می‌شود.

2 دیدگاه

  1. مختصر مفید و کامل ضمنا از زحماتی که بابت کانال مفیدتان و همچنین سایت ارزشمندتون می کشید قدر دانی می کنم

بزرگترین فروشگاه مجازی پژوهشی کشور رد کردن